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HBV           ★★★ 【字体：小 大】
HBV
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-1    
作者：于爱莲,乔云波, 张丰雪, 赵英会, 李栋, 韩子强
【关键词】  ,宫内感染
    Relationship between serum hepatitis B virus DNA load  and intrauterine infection  in pregnant women
　　【Abstract】 AIM:  To study the relationship between serum hepatitis B virus (HBV) DNA load in pregnant women and intrauterine infection as well as other relative factors. METHODS:  Two hundred and twentyeight cases of HBsAg positive pregnant women were screened out by ELISA. HBVDNA content was detected with fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR）in HBsAg positive pregnant women and their fetal cord blood. According to the results of  HBVDNA, the newborns were divided into infected group and noninfected group（control group）. Relative factors were investigated in infected group and control group with intrauterine infection. RESULTS:  Cord blood positivity rate of HBVDNA was 21％（14/68）in HBsAg, HBeAg and antiHBc positive pregnant women, 1.7％（2/117）in HBsAg, antiHBe and antiHBc positive pregnant women, 20％（3/15）in HBsAg and HBeAg positive pregnant women, and 11％（2/19）in HBsAg and antiHBc positive pregnant women. HBVDNA was not detected in only HBsAg positive pregnant women. The total infection rate in fetus was 9.2％. Intrauterine infection rate increased significantly when HBVDNA level increased in the blood of pregnant women and the risk for  fetal intrauterine infection also increased. Threatened premature labor in fetal infection group was higher than that in control group（P<0.05）. CONCLUSION:  Intrauterine infection rate is associated with the HBV infection status of the pregnant women. HBeAg positivity and high level of maternal HBVDNA  are  the high risk factors of fetal intrauterine infection. Threatened premature labor in pregnant women may lead to higher infection rate in fetus.
　　【Keywords】 hepatitis B virus;  intrauterine infection; polymerase chain reaction
　　【摘要】  目的： 探讨孕妇血清中HBVDNA含量与胎儿宫内感染及造成宫内感染的相关因素.  方法： 用ELISA方法筛选HBsAg阳性孕妇228例，并用定量PCR技术检测HBsAg阳性孕妇血清以及脐血中HBVDNA. 新生儿根据有无HBV感染分为胎儿感染组及非感染组（对照组），调查宫内感染的相关因素.  结果： HBsAg, HBeAg、抗HBc阳性孕妇的新生儿脐血HBVDNA捡出率21%（14/68）；HBsAg, 抗HBe, 抗HBc阳性者为1.7%（2/117）；HBsAg和HBeAg双阳性者为20%（3/15）;HBsAg和抗HBc阳性者为11%（2/19）；HBsAg单一抗原阳性者脐血中未捡出HBVDNA. 胎儿总感染率为9.2%（21/228），胎儿宫内感染率随孕妇血清中HBVDNA含量增加而升高，宫内感染的危险性越大. 胎儿感染组与非感染组在多种临床相关因素中先兆早产孕妇胎儿感染者多于非感染组（P<0.05）. 结论： 孕妇不同的感染状态影响宫内HBV感染率，HBeAg与HBVDNA高滴度是胎儿宫内感染的高危因素. 孕妇出现先兆早产使胎儿的感染率增加.
　　【关键词】 肝炎病毒，乙型； 宫内感染；聚合酶链反应
　　0引言
　　全世界乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）慢性携带者约有3.5亿［1］，我国是HBV感染的高发区，HBsAg携带者亦高达10%~15%，慢性HBV携带者超过1.2亿. 绝大多数HBV感染始于儿童时期，据估计在HBV感染者中由母婴传播所致超过60%，美国每年出生的婴儿中约有1.9万～2.2万婴儿的母亲是HBsAg阳性者，而亚洲HBV感染者中估计有30%~50%是通过母婴传播形成［2］.  我们采用荧光定量聚合酶链反应（FQPCR）技术对HBV感染孕妇血清、脐血进行HBVDNA定量检测，分析HBV感染的相关因素.
　　1对象和方法
　　1.1对象
　　200101/200306在聊城地区人民医院、济南市妇幼保健院、泰安市各计划生育服务站等收集、筛选HBsAg阳性的孕妇228例，年龄23～38（29±4）岁，妊娠17～44 wk.
 
　　1.2方法
　　外周血：分娩前采集孕妇肘静脉血5 mL，分离血清，-20℃保存，待检. 脐血：胎儿娩出后，胎盘侧立即擦净胎儿面脐带表面血迹，消毒后取脐带血5 mL，分离血清-20℃保存.   采用ELISA检测血清中HBsAg, HBeAg、抗HBs、抗HBe和抗HBc. 试剂盒购自厦门泰伦生物工程有限公司，严格按试剂盒说明书进行. 采用荧光定量PCR法，试剂购自广州达安基因有限公司. 具体过程为DNA提取，取50  μL裂解液至离心管中，加待测血清50 μL，沸水煮10 min，离心. PCR扩增，取处理后样品和质控标准品2 μL同时进行. 扩增条件93℃ 2 min预变性，然后按93℃ 30 s, -55℃  60 s，40个循环. 反应结束后，通过微机处理系统分析HBVDNA的含量. P<0.05认为有统计学差异.
 
　　统计学处理：  用SAS6.12统计软件进行分析结果. 计数资料采用χ2检验.
　　2结果
　　本文研究的228例孕妇中，其中HBsAg， HBeAg和抗HBc阳性（大三阳）者68例；HBsAg, HBeAb和HBcAb阳性（小三阳）者117例；HBcAb, HBsAg阳性者19例；HBsAg, HBeAg阳性15例；HBsAg单一阳性者9例.
　　2.1孕妇HBV感染者血清标志物阳性模式与宫内感染研究的228例孕妇与其配对的脐血HBVDNA阳性者21例(9.2%).  HBsAg, HBeAg和抗HBc阳性者孕妇血清HBVDNA检出率和脐血HBVDNA的检出率均明显高于HBsAg、抗HBe和抗HBc阳性孕妇血清和脐血HBVDNA检出率，差异有显著性（P<0.01, Tab 1）.表1孕妇HBV感染者血清标志物阳性模式与脐血感染状况（略）
　　2.2HBeAg与脐血HBVDNA的关系21例脐血阳性的新生儿中，有17例为HBeAg阳性母亲所生，阳性率为22%（17/76），4例发生于HBeAg阴性的母亲，阳性率为3%（4/145），有显著性差异（P<0.01, Tab 1）.
　　2.3孕妇血清HBVDNA含量与胎儿宫内感染 136例孕妇血清HBVDNA阴性者，其脐血HBVDNA均为阴性，21例脐血HBVDNA阳性的新生儿，其母亲均是HBVDNA阳性，并且胎儿宫内感染，随着孕妇血清HBVDNA含量的增加而呈增高的趋势. 根据孕妇血清中HBVDNA的拷贝数分为小于104, 104～107和大于107三组.  孕妇血清中HBVDNA的拷贝数在大于107组中，其宫内感染率明显高于HBVDNA拷贝数为104～107和小于104组，差异有显著性意义（P<0.01, Tab 2）. 各层OR值从1.00升至20.50. 表2孕妇血清HBVDNA拷贝数与胎儿宫内感染（略）
　　2.4影响胎儿感染HBV的临床相关因素对21例胎儿感染组和80例非感染组（对照组）在孕妇年龄、孕次、孕周和性别等指标进行比较，结果为感染组和对照组的孕妇年龄分别为(27±4)和(28±4)岁；孕次为1.8±0.8和1.8±0.9；孕周为39.2±1.0和38.2±3.0；感染组的婴儿性别为男性11，女性10；对照组为男性41，女性39. 分析以上指标，感染组与对照组差异均无显著性（P>0.05）. 在其他7项因素中，先兆早产的孕妇其胎儿感染的阳性率高于对照组（0R＝3.87, χ2＝5.44,  P<0.05, Tab 3). 表3胎儿宫内感染HBV的临床指标分析（略）
　　3讨论
　　3.1HBV宫内感染率宫内感染率各地报道差异较大，这可能与研究对象和检测手段不同有关. 以新生儿外周血为标准的发生率为8.3%，而以引产胎儿为标准的发生率为4.6%～44.4%，检测方法上存在差异，用HBsAg阳性的血清免疫学方法来检测HBV，宫内感染率为5%～14%；免疫组化法宫内感染率为5.90%；用PCR技术检测脐血中HBVDNA的阳性率各地报道为13.0%～37.9%［3-5］.  本研究应用荧光定量PCR技术检测孕妇HBsAg阳性者的配对脐血中HBVDNA，其宫内总感染率为9.2%，低于文献报道. 这可能与选择的研究对象不同有关.
 
　　3.2HBV宫内感染发生的危险因素妊娠期由于多种因素影响使肝脏负担加重，合并病毒性肝炎时，可使妊高症、产后出血、早产、死胎、胎膜早破等并发症的发生率增加［6］. 我们研究结果显示，胎儿感染与孕妇年龄、孕周、怀孕次数、头盆不称、分娩方式、妊高症、人工流产史等因素无关. 有学者报道女性新生儿HBV宫内感染多于男性，1992年岳亚飞等报道男婴感染率高于女婴，本文研究则显示，乙肝病毒感染与胎儿性别无关. 先兆早产孕妇是宫内感染的危险因素，这与文献报道一致［7］. 其机制可能是先兆早产使胎盘屏障受到损伤，母亲HBeAg阳性血在产前通过胎盘渗漏造成母血交流，从而导致宫内感染.
　据报道，HBsAg阳性孕妇中，约10%胎儿通过胎盘感染乙肝病毒，HBsAg合并HBeAg阳性的母婴传播率高达92%～97%. 孕妇血中高滴度的HBVDNA是胎儿感染的高危因素. 用ELISA双抗夹心法检测HBV双抗原及核心抗体阳性孕妇HBV母婴垂直传播为60%［8］，本研究中大三阳者孕妇血清HBVDNA检出率为95.38%，小三阳者捡出率为5.13%，差异有显著性（P<0.01）；大三阳孕妇所生婴儿脐血中HBVDNA阳性率为20.59%，小三阳阳性率为1.70%，差异有显著性（P<0.01）. 研究［9］发现，在受感染的21例新生儿中有17例为孕妇HBeAg阳性，其中16例HBVDNA也呈阳性，提示HBeAg和HBVDNA均阳性是宫内感染的高危因素. 新近报道［10］孕期HBeAg阳性不仅是乙肝病毒宫内感染的高危因素，也是婴儿HBV慢性感染的主要危险因素，说明孕妇HBeAg阳性对乙肝病毒宫内感染起到至关重要的作用. HBeAg是免疫耐受因子，HBeAg通过胎盘由母亲传给胎儿可诱导胎儿T细胞对HBeAg、HBcAg产生耐受而导致围产期感染者HBV感染慢性化. 既往我国以患者血清HBeAg检测结果作为HBV复制的指标，现已证实HBeAg是存在于HBV外膜上的一种分泌型核壳蛋白，其基因表达十分保守，终止HBeAg表达的病毒，并不终止病毒复制，说明HBeAg是衡量HBV复制的间接指标. 血清HBVDNA是反映病毒在体内复制和宿主传染性的直接指标［11］，因此应用PCR技术检测核酸，敏感性和特异性均较高，能有效的反映病毒含量，估计宿主的传染性更为直接可靠.
我们研究表明，随着母亲孕期HBVDNA含量的增加，胎儿感染的风险也随之增高，孕妇血清HBVDNA的含量，标志着其乙肝传染性的强弱. 由于宫内感染是导致母婴阻断失败的重要原因，孕期监测HBVDNA的水平，采取有效措施抑制病毒的复制，能够降低外周血HBVDNA的含量，预防宫内感染.
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