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甲状腺癌组织中EG-1基因的表达与预后的相关研究           ★★★ 【字体：小 大】
甲状腺癌组织中EG-1基因的表达与预后的相关研究
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-3    
作者：朱见　田兴松　周文红　丛明华　陈悦之
【摘要】  目的：研究EG-1基因在甲状腺癌组织中的表达并分析其与预后的关系，为评价甲状腺癌的预后提供分子生物学标记。方法:用RT-PCR方法检测52例甲状腺癌组织中EG-1基因表达情况，分析比较EG-1基因表达组（38例）和未表达组（14例）的生存资料。同时与良性甲状腺疾病组织（15例）进行对照。结果：甲状腺癌组织中存在EG-1基因的表达，甲状腺良恶性组织EG-1基因表达具有统计学差异（P<0.05）。甲状腺癌EG-1基因表达组和未表达组生存率有统计学差别 （P <0.05）。EG-1基因表达组预后差,与未表达组死亡风险危险度比值为4.947 （P<0.05）。结论：甲状腺癌组织中存在EG-1基因的高表达，且EG-1基因表达组预后差。EG-1基因可能成为评价甲状腺癌预后的重要的分子生物学标记。
【关键词】  甲状腺肿瘤·癌基因·Endothelial derived gene 1·肿瘤标记,生物学·预后
    【ABSTRACT】 Objective: To study the expression of EG-1 in thyroid cancer tissue and analyze its correlation with clinical prognosis. Methods: EG-1 mRNA levels in malignant thyroid tissues were evaluated by RT-PCR. All patients were followed up. The survival rates were analyze in EG-1 positive group and EG-1 negative group. Benign thyroid tissues were used as control. Results：EG-1 was expressed in thyroid cancer. The differences between expression of malignant thyroid tissues and benign thyroid tissues were statistically significant （P＜0. 05）. In thyroid cancer, the survival rate differences between negative and positive groups of EG-1 had statistical significance （P＜0.05）. EG-1 positive group was with bad prognosis. Conclusion: EG-1 was expressed in thyroid cancer and might be used as an important prognostic marker.
    【KEY WORDS】 Thyroid neoplasms ·Oncogenes·Endothelial derived gene 1·Tumor markers, biological·Prognosis
    　　Endothelial derived gene 1（EG-1）是Liu等［１］研究肿瘤条件液环境下和正常培养液环境下脐静脉内皮细胞基因表达差异时，通过抑制性消减杂交技术筛选出的明显表达的一种上调基因。该基因定位于4号染色体，编码一个由178个氨基酸组成，相对分子质量19.5×103的蛋白质。研究发现其与内皮、上皮细胞的增生激活状态密切相关，推测可能与恶性肿瘤的肿瘤血管形成有关［１］。实体瘤相关研究中证实在乳腺癌细胞、结直肠癌细胞及前列腺癌细胞中均有该基因过表达［２］。
    　　目前在甲状腺癌方面，国内外尚未有EG-1的相关研究。本研究通过RT-PCR的方法，检测EG-1基因在甲状腺癌组织中表达情况，分析其表达和甲状腺癌的预后的关系，判断EG-1基因在评价甲状腺癌预后方面可能存在的价值。
    1　资料和方法
    1.1　资料和评价系统　收集2000年2月—2002年9月山东省立医院普外科收治的52例甲状腺癌患者资料，其中男17例，女35例；中位年龄49岁（19～62岁）。均经病理科专家确诊，乳头状癌36例，滤泡状癌8例，未分化癌5例，髓样癌3例。随访截止日期为2007年5月，中位随访时间为70个月（8～87个月）。随访期间死于其他原因、失访或研究截止仍生存者，均记为删失数据，共7例。取15例良性甲状腺疾病（结节性甲状腺肿）病例作为对照。所有病例均获取其甲状腺组织石蜡包埋块。
    　　考虑患者发病年龄和肿瘤大小对患者预后影响，参照Shaha 等［３］的研究结果，发病年龄以45岁为界，肿瘤大小以4 cm为界，将52例甲状腺癌患者分组。
    　　甲状腺癌的组织学分级参照SAG评分标准［4］。SAG评分0分为Ⅰ级，1分为Ⅱ 级，2～3分为Ⅲ级。甲状腺癌的肿瘤分期参照2002年美国癌症联合会（UICC）甲状腺癌最新分期标准［５］ 。
    　　使用AMES［６］, AGES［７］和MACIS［８］评分系统评价预后。AMES评分高危组23例，低危组29例；AGES评分以5为界，高危组（≥  5分）21例和低危组（<5分）31例；MACIS评分以7为界，高危组（≥7分）17例，低危组（<7分）35例。各评分系统行单因素生存分析。
    1.2　RT-PCR检测EG-1基因的表达
    1.2.1　RNA 提取　选用Ambion公司Paraffin Block RNA Isolation kit试剂盒，参照文献 ［９-１０］提取甲状腺组织中EG-1 mRNA，紫外可见光分光光度计测定含量。
    1.2.2　目的RNA 扩增　应用上海生工逆转录试剂盒（SK2028），配成20μL反应体系，RNA模板12μL，转录合成cDNA。选择β-actin 做内参照进行扩增，引物序列为:正义链5'-ACACTGTGCCCATCTACGAGGGG-3'，反义链5'-ATGAGTGAGTTGAAGGTAGTTTCGTGGAT-3'（上海生工合成）。扩增片段366 bp。目的基因EG-1 扩增的引物序列为，上游引物5’-TGCATCTCTGGTGAGTCAGG-3’，下游引物5 ’-TGCCTCAGCTTTGTCAAGTG-3’（上海生工合成），扩增片段246  bp。RT-PCR 扩增选用Biometra PCR 仪，扩增体系为20 μL，其中模板2 μL。
    1.2.3　结果判定　RT-PCR 后1.5%琼脂糖凝胶行电泳, 紫外可见光分光光度计检测EG-1扩增产物为246 bp的特异性条带。
    1.3　统计学分析　采用SPSS 10.0统计分析软件，良恶性甲状腺组织中EG-1基因表达差异比较采用四格表资料的卡方检验，单因素生存分析应用Kaplan-Meier 生存曲线分布的时序检验，多因素生存分析应用Cox 比例风险回归模型。P≤0.05为差异有统计学意义。
2　结果
    2.1　EG-1基因在甲状腺组织中的表达　52例甲状腺癌组织中，38例检测到EG-1 mRNA，表达率73.08%。15例甲状腺良性结节中，4例检测到EG-1基因的表达，表达率为26.67%,两者差异有统计学意义，χ2=10.720，P <0.05（图1）。
    2.2　单因素生存分析　甲状腺癌患者EG-1基因表达组（38例）和未表达组（14例）总生存曲线分析存在差异，P=0.025（图2）。年龄、淋巴结转移、肿瘤分期、病理类型的不同组别间总生存曲线比较差异均有统计学意义，性别间总生存曲线比较差异无统计学意义（表1）。
    2.3　多因素生存分析　EG-1基因表达、年龄、淋巴结转移、肿瘤分期、病理类型均为预测甲状腺癌生存率的独立预后因素，其中 EG-1基因表达组死亡风险与未表达组相比明显增高,RR=4.947，P=0.008（表2）。
    2.4　评分系统评分与生存分析　对AMES、AGES 和MACIS的高危组与低危组生存曲线行单因素生存分析，P值分别为0.001,0.044和<0.001，差异均有统计学意义。
    3　讨论
    　　甲状腺癌的发生约占全身恶性肿瘤的1%,在神经内分泌系统恶性肿瘤中占90%以上。据统计大约5%-10%的人在一生中可能会发现具有临床意义的甲状腺结节［９］。在所有恶性肿瘤中，甲状腺癌预后相对较好。影响甲状腺癌预后的因素很多，包括病理类型、临床分期、年龄、治疗等。如果能够找到较好评价甲状腺癌预后的分子生物学标记，就可以通过对该标记的检测，判断甲状腺癌的预后，从而合理制定甲状腺癌患者复诊时间，指导临床治疗。
    　　自EG-1基因（基因库：AF358829）发现以来,在肝脏、胎盘、睾丸及成纤维细胞、肌上皮细胞、肝细胞和肺上皮细胞中均发现EG-1基因的表达。有资料报道，乳腺癌、结肠癌、前列腺癌及黑色素瘤细胞中有EG-1基因的表达，且结肠癌、乳腺癌及前列腺癌细胞中的表达均较正常上皮组织明显升高［２］。转染EG-1基因的乳腺癌细胞及HEK-293细胞，增殖活性明显增强；通过siRNA 干扰EG-1基因表达后，细胞增殖活性下降；将两种细胞接种于小鼠体内，发现转染EG-1基因的小鼠瘤体增长快，siRNA干扰后，瘤体生长速度变慢［１０］。EG-1基因与内皮、上皮细胞的增生激活状态密切相关。MAPK 信号转导通路是细胞增殖过程中重要的传导通路 ［１１］。通过研究转染空载体和转染EG-1基因细胞对细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein kinase 1，ERK）1和2、c-jun-NH2激酶、p38的表达发现，转染EG-1基因的细胞其表达明显上调，提示EG-1基因可能通过MAPK途径促进细胞增殖［１０］。有研究分析EG-1基因翻译蛋白结构发现，其N端为多脯氨酸基团，可以与c-Src蛋白SH3基团相互作用；体外蛋白结合分析和体内转染EG-1基因后蛋白印迹均发现EG-1与c-Src蛋白的结合物，且转染后c-Src蛋白总量未发生变化，但活性较前明显增强；体外激酶分析排除EG-1为c-Src蛋白激酶底物的可能，从而推测EG-1可以通过 c-Src激酶途径促进细胞增殖［１２］。
    　　EG-1可能通过激活MAPK、c-Src等信号传导通路，增强甲状腺癌的恶性行为，但具体的作用机制尚未明确。本研究发现，甲状腺癌组织中存在EG-1基因的表达，且与结节性甲状腺肿组织存在统计学差异（χ2=10.720, P<0.05）。通过单因素生存分析，甲状腺癌患者EG-1基因表达组与未表达组的生存率存在明显统计学差异（P=0.025），多因素Cox 比例风险回归分析认为EG-1基因可以作为甲状腺癌预后的独立危险因素（P=0.008，RR=4.947）。本研究结果显示，病理类型、年龄、组织学分级、肿瘤分期、肿瘤包膜完整性、淋巴结有无转移、有无血管浸润均影响甲状腺癌预后；通过AMES、AGES 和MACIS评分预测甲状腺癌的预后是可行的；EG-1基因可能成为评价甲状腺癌患者预后的较好的分子生物学标志。通过检测该基因的表达，有助于确切评价甲状腺癌患者的预后，制定合理的复诊时间。
【参考文献】
  [1] Liu C, Zhang L, Shao Z, et al. Identification of a novel endothelial-derived gene EG-1[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2002,290（1）:602-612.

[2] Zhang L, Maul RS, Rao J, et al. Expression pattern of novel gene EG-1 in cancer[J]. Clin canc Res, 2004,10:3504-3508.

[3] Shaha AR. Implications of prognostic factors and risk groups in the management of differenttiated thyroidcancer[J]. Laryngoscope, 2004, 114:393-402.

[4] Akslen LA, LiVosli VA. Prognostic significance of histologic grading compared with subclassification of papillary thyroid carcinoma[J]. Cancer, 2000,88:1902-1908.

[5] Sobin LH, Wittekind Ch. TNM classification of malignant tumors[M]. 6th ed. New York: Wiley-Liss, 2002: 52-56.

[6] Cady B, Rossi R. An expanded view of risk-groupdefinition in differentiated thyroid carcinoma[J]. Surgery, 1988,104: 947-953.

[7] Hay ID, Grant CS, Taylor WF, et al. Ipsilateral lobectomy versus bilateral lobar resection in papillary thyroid carcinoma: A retrospective analysis of surgical outcome using a novel prognostic scoringsystem[J]. Surgery, 1987,102:1088-1095.

[8] Hay ID, Bergstralh EJ, Goellner JR, et al. Predicting outcome in papillary thyroidcarcinoma: Development of a reliable prognosticscoring system in a cohort of 1779 patients surgically treated at one institution during 1940 through 1989[J]. Surgery, 1993,114:1050-1058.

[9] Ernest L, Mazzaferri. Management of a solitary thyroid nodule[J]. N Engl J Med, 1993,328:553-559.

[10] Lu M, Zhang L, Maul RS, et al. The novel gene EG-1 stimulates cellular proliferation[J]. Cancer Res, 2005,65:6159-6166.

[11] Johnson GL, Lapadat R. Mitogen activated protein kinase pathways mediated by ERK, JNK, and p38 protein kinases[J]. Science，2002，298：1911-1912.

[12] Lu M, Zhang L, Sartippour MR, et al. EG-1 interacts with c-Src and activates its signaling pathway[J]. Int J Oncol, 2006,29:1013-1018.
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