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高效液相色谱法测定水煎法提取中成药中的甘草酸含量           ★★★ 【字体：小 大】
高效液相色谱法测定水煎法提取中成药中的甘草酸含量
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-30    
 作者：杜学勤，刘焕蓉，郭志强，邓并

【摘要】  目的建立HPLC法测定以水煎法提取19种中成药中甘草酸（GA）的含量。方法采用日本岛津PC8色谱柱；流动相为甲醇-水-醋酸（57.0∶42.6∶0.4）；检测波长为254 nm；流速2.0 ml·min-1。结果甘草酸在200～2000 μg·ml-1，r=0.999 7的浓度范围内线性关系良好，平均回收率为96.55%，RSD=1.1%；同时研究了22种单味药对甘草中GA含量测定的影响。结论 通过与冷浸法比较，水煎法和冷浸法提取中成药中GA含量差值较大，且水煎法的偏低。

【关键词】  中成药；甘草酸；高效液相色谱法；水煎法


　　Determination of Glycyrrhizic Acid in the Water Extraction in Chinese Patent Medicine by HPLC

　　Abstract：ObjectiveAn HPLC method was established for the determination of glycyrrhizic acid (GA) by extracting method of decoction in 19 kinds Chinese patent medicine prepared in laboratory.Methods PC8 column was used with methanol-water-cuetu acid (57.0∶42.6∶0.4) as mobile phase. The flow rate was 2.0ml·min-1 and detection wavelength was 254nm.ResultsThe linear relationship was good when the content of glycyrrhizic acid (GA) was in the range of 200～2 000 μg·ml-1（r=0.999 7）.The average recovery and RSD were 96.55% and 1.1% respectively. The paper also studied the interference determination of GA by selecting interrelation 22 kinds of single medicinal material.ConclusionBy comparison the decoction with the infusion ，the results shows that the content of GA by extraction decoction was lower than that by infusion.

　　Key words： Chinese  patent medicine ;   Glycyrrhizic acid;   HPLC;  Decoction

    甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza  uralensis Fisch.，胀果甘草Glycyrrhiza  inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功［1］，被广泛用于中药制剂处方中。甘草中主要活性成分为甘草酸［2］(glycyrrhizic acid，GA)，因此,我们选定甘草酸作为含甘草中成药的质量控制指标。甘草酸的含量测定方法报道很多，但大多数方法操作复杂，定量不够精确。近年来, 高效液相色谱法测定GA也已有报道［3～6］，但对水煎法提取中成药中GA含量测定方法尚未见报道。本文在冷浸法研究的基础上采用高效液相色谱法测定水煎生药中的GA和不同剂型中药复方制剂中的GA含量，为评价含GA药材及其制剂的质量提供了一个准确、灵敏、快速的测定方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器 

　　日本岛津LC3A型高效液相色谱仪；日本岛津SPD-1型紫外吸收检测器；日本岛津CRIB型色谱仪数据处理机。

　　1.2  试剂无水甲醇、冰醋酸（均为分析纯，北京化工厂生产）；甘草酸铵盐对照品：（旋光度［a］20D60.5熔点209℃）纯度88.00%（内蒙呼和浩特天然甜素厂）；粉甘草（山西产）。

    单味中药材：滑石、朱砂、香附、陈皮、紫苏叶、葛根、黄芩、黄连、玄参、麦门冬、桔梗、麻黄、杏仁、生石膏、萆薢 、乌药、石菖蒲、益智仁、生地黄、当归、防风、蒲公英、金银花、连翘、紫菀、百部、海螵蛸、白芍、党参、白术、元胡、大黄、芒硝、枳实、厚朴、人参、茯苓、法半夏、橘红、木香、砂仁、冰片、川芎、白芷、羌活、细辛、薄荷、荆芥、柴胡、赤芍、桂枝、五味子、干姜、大枣（均为市售）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱为日本岛津PC8柱（4 mm× 250 mm）；流动相：甲醇-水-醋酸（57.0∶42.6∶0.4）；流速2.0 ml·min-1；柱温：40℃；纸速2.5 mm·min-1；检测波长254 nm；进样量5 μl。
    本文是在冷浸法测定GA含量研究的基础上，考察水煎法，从而进行比较。所以首选冷浸法的色谱条件，测定水煎法中药制剂及生药中甘草酸与其它成分的分离。结果见图1～2。

　　2.2  对照品溶液制备取105℃干燥至恒重的甘草酸铵盐对照品精确称定，加甲醇制成每毫升含2.0 mg的溶液，热溶，作为对照品贮备液。2.3   甘草供试品溶液制备取甘草细粉约3 g, 精确称定，置150 ml平底烧瓶内，加入100 ml蒸馏水于电炉上煎煮回流1 h放冷,过滤，离心分离10 min(3 000 r/min)，吸取上清液,经沸水浴上蒸干,以约50 ml 57%甲醇溶液溶解残渣，经G4砂芯漏斗抽滤，以57%甲醇稀释至100 ml。

　　2.4  含甘草中药制剂样品溶液取300.0 mg甘草粉，加入相应成方比例的各种单味药粉，混匀后，水煎法提取，方法如前。

　　2.5  线性关系考察分别精确量取甘草酸铵盐对照品贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml置于5 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，按上述色谱条件，分别依次进样，进样量5 μl，测定峰面积。以甘草酸的峰面积（Y）对其浓度（X）进行线性回归，得回归方程。  Y=2.42×103X-1.745×104，r=0.999 7。结果表明在200～2 000 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。

　　2.6  精确度实验 精密吸取甘草酸铵盐对照品溶液5μl，按上述色谱条件，连续进样5次，结果平均峰面积为101 326，RSD值为1.65%。

　　2.7  重复性实验取甘草供试品溶液，分别进样6次测定其峰面积，并计算甘草酸的含量，结果甘草酸的含量平均值为7.76%，RSD值为1.4%。

　　2.8  回收率实验精确称取0.300 0 g甘草粉5份，分别加入GA对照品20.0 mg，混匀。按水煎法提取进行制样，分别进样5 μl，然后计算回收率，结果见表1。表1表明回收率偏低，其主要原因是：溶媒的溶出率一般小于100%；残渣有吸附现象；多步骤方法易损失，但结果符合中药新制剂开发与应用标准［7］。表1   GA回收率的测定结果（略）

　　2.9  单味药干扰甘草中GA含量的测定 

　　为普查各单味药对甘草中GA含量测定的影响，选用与本文所列中成药有关的22种单味药分别与甘草配比,以水煎法提取测其干扰情况，并作了阴性对照样品，样品制备步骤与水煎法中成药中GA的含量测定方法完全相同，并与冷浸法作了对比，结果见图3和表2。表2表明，黄连、厚朴分别因化学反应和杂峰并入产生严重干扰；11味药产生一般干扰（84.02%～89.39%）；7味药轻微干扰（90.28%～93.48%）；3味药无干扰（95.01%～102.43%）。表2  单味药对甘草中GA含量测定的影响（略）

　　2.10  样品测定依据经典成方在实验室制备出19种制剂，用水煎法提取, 按上述色谱条件进样测定。结果见表3。表3   中成药中GA含量测定（略）

　　3  讨  论  

　　3.1  本实验采用水煎法对中成药中GA含量进行测定并与冷浸法测定结果比较，从表2～3中可见，水煎法和冷浸法提取中成药中GA含量差值较大，且水煎法的偏低。这一结果说明，对于一些在制剂过程中不经煎煮步骤的成药，经冷浸法提取后测定的GA含量，可较为客观地反映实际入药量。

　　3.2  流动相中加入0.4%醋酸起离子抑制作用，可将甘草酸游离出来，使被测成分以分子形式存在，从而改善了峰形，避免了色谱峰的拖尾现象。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：65.

　　［2］阴 健,郭 力.中药现代研究与临床应用［M］.北京：学苑出版社,1993：196.

　　［3］吕归宝,刘 军.高效液相色谱法测定甘草及其制剂中甘草酸的含量［J］.药物分析杂志,1988 ,8(3)：137.

　　［4］阎东海.反相高效液相色谱法测定千升白冲剂中甘草酸的含量［J］.药物分析杂志,1993,13(6)：381.

　　［5］官曙光,周 全,孙其荣.高效液相色谱法测定桂甘胶囊中甘草酸的含量［J］.中成药,1996,18(12)：44.

　　［6］杜学勤，刘焕蓉，邓 并.HPLC测定冷浸法提取中成药中的甘草酸含量［J］.山西大学学报，2002，1(25):48.

　　［7］谢秀琼. 中药新制剂开发与应用，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2000：314.
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