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| 柴苓归芪汤加蚓激酶对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用 | |||||
作者：佚名 论文来源：本站原创 点击数： 更新时间：2008-10-4  |
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【关键词】 柴苓归芪汤 ［摘要］ 目的：探讨柴苓归芪汤加蚓激酶对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用。方法：采用尾静脉一次性注射阿霉素5 mg/kg制作肾病大鼠模型，随机分为模型组、辛伐他汀组、柴苓归芪组，并设正常对照组。造模1周后，予以药物干预，共用药5周。采用三氯乙酸法测定大鼠24 h尿蛋白含量；全自动生化分析仪检测血清总蛋白（total protein, TP）、白蛋白（albumin, Alb）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein, HDL）、低密度脂蛋白（lowdensity lipoprotein, LDL）、肌酐（creatinine, Cr）及血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）。光镜、电镜下观察肾组织病理形态学变化。结果：模型组与正常对照组比较，24 h尿蛋白定量及血清TC、TG、LDL、Cr、BUN均明显升高（P＜0.05或P＜0.01)；血清TP、Alb、HDL则明显降低（P＜0.01)。柴苓归芪汤组24 h尿蛋白定量及血清TC、TG、LDL、Cr、BUN均明显低于模型组（P＜0.05或P＜0.01)；而血清TP、Alb和HDL则明显高于模型组（P＜0.05或P＜0.01)。肾组织病理形态学观察：模型组光镜下部分肾小球呈局灶节段性硬化，近曲小管上皮细胞变性肿胀，部分小管腔内可见蛋白管型，间质可见散在的纤维增生；电镜下肾小球上皮细胞足突广泛融合。柴苓归芪汤组未出现肾小球硬化，肾小管间质病变明显减轻，肾小球上皮细胞足突少量融合。结论：柴苓归芪汤能够降低大鼠尿蛋白，调节脂质代谢紊乱，保护肾脏功能，延缓肾脏疾病进展。 ［关键词］ 柴苓归芪汤; 阿霉素肾病; 蛋白尿; 脂质代谢; 高脂血症; 肾组织; 病理形态学 Protective effects of Chailing Guiqi Decoction combined with lumbrukinase on renal function in rats with adriamycin nephropathy ABSTRACT Objective: To study the protective efffects of Chailing Guiqi Decoction (CLGQD) combined with lumbrukinase on renal function in rats with adriamycin nephropathy. Methods: Thirtysix SD rats were randomly divided into four groups: normal control group, untreated group, simvastatintreated group and CLGQD treated group. Adriamycin nephropathy was induced by intravenous injection with 5 mg/kg adriamycin. After sevenday treatment, quantitative measurement of 24h urine protein was determined with trichloroacetic acid, and serum total protein (TP), albumin (Alb), total cholesterol (TC), triglycerides (TG), highdensity lipoprotein (HDL), lowdensity lipoprotein (LDL), creatinine (Cr) and blood urea nitrogen (BUN) were assessed using automatic biochemistry analyzer. The pathomorphological changes of renal tissues were observed with light and electron microscopes. Results: In the untreated group, the 24h urine protein excretion, serum TC, TG, LDL, Cr and BUN were significantly higher than those in the normal control group (P＜0.05 or P＜0.01), while the serum TP, Alb, HDL were significantly lower than those in the normal control group (P＜0.01). In the CLGQDtreated group, the 24h urine protein excretion, serum TC, TG, LDL, Cr and BUN were significantly lower as compared with those in the untreated group (P＜0.05 or P＜0.01), while the serum TP, Alb and HDL were significantly higher as compared with those in the untreated group (P＜0.05 or P＜0.01). The pathomorphological findings of the renal tissues under the light microscope in the untreated group showed focal segmental glomerulosclerosis in a few of glomerulus, degenerated and swelled proximal tubular epithelial cells, proteins in cast formation in some renal tubules and scattered fibrosis in interstitial tissues of the kidney, while the electron microscope images showed the fusion of foot processes in glomerular epithelial cells. The pathomorphological changes in the CLGQDtreated group were slighter than those in the untreated group. Conclusion: CLGQD combined with lumbrukinase can reduce proteinuria, regulate lipid metabolism, protect renal function, and delay progressive renal damage in rats. KEY WORDS Chailing Guiqi Decoction; adriamycin nephropathy; proteinuria; lipid metabolism; hyperlipidemia; renal tissue; pathomorphology 阿霉素肾病（adriamycin nephropathy, AN）大鼠模型是经典的实验性肾病综合征模型之一，初期的病理改变类似于人的微小病变型肾病，进一步发展可形成局灶节段性肾小球硬化［1］。本实验采用此模型，观察柴苓归芪汤对大鼠血、尿生化指标及肾组织病理形态学的影响，并以他汀类降脂药物辛伐他汀作为对照，重点观察该方对尿蛋白及脂质代谢的影响，探讨该方保护肾功能及防止肾功能衰竭发生的作用机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 选用清洁级健康雄性SD大鼠36只，体质量(180±10 ) g，河北医科大学动物中心提供，编号DK03110102。 1.1.2 实验用药 阿霉素注射针剂，10 mg/支，汕头经济特区明治医药有限公司生产，批号020702。柴苓归芪汤组成：柴胡10 g、黄芩10 g、当归15 g、黄芪30 g、茯苓15 g、猪苓12 g和地龙。除地龙外，余药经水煎、过滤、浓缩后，制备成含生药1.8 g/ml的煎剂。地龙中主要活性成分蚓激酶在65 ℃以上时活性开始下降，85℃ 30 min活性完全丧失［2］，因此不能入煎剂，故用其提取物蚓激酶代替地龙冲服使用。蚓激酶，30万U/粒（1 500 U/mg），北京百奥药业有限责任公司生产，批号20030706；辛伐他汀，10 mg/片，杭州默沙东制药有限公司生产，批号N1027。 1.2 分组、造模及药物处理 所有实验动物予以普通饲料适应性喂养1周后，置于清洁代谢笼内取尿以检测尿蛋白和尿红细胞，全部为阴性。36只大鼠随机分为正常对照组（6只）、模型组（10只）、辛伐他汀组（10只）和柴苓归芪组（10只）。模型组、辛伐他汀组和柴苓归芪组予以尾静脉注射阿霉素（5 mg/kg），正常对照组注射等量生理盐水。造模1周后开始灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀1 mg・kg1・d1，柴苓归芪组给予柴苓归芪汤煎剂27 g・kg1・d1，用药剂量均为成人的15倍；蚓激酶按25 mg/kg，2次/d给药［3］。正常对照组和模型组均灌服等量蒸馏水。共用药5周。 1.3 检测指标与方法 1.3.1 24 h尿蛋白的检测 于实验第2、3、4、5、6、7周末将大鼠置于清洁代谢笼内，留取24 h尿液，用三氯乙酸法测定24 h尿蛋白定量。 1.3.2 血清生化指标的检测 于实验第7周末用10%水合氯醛按30 mg/kg予以大鼠腹腔注射，待麻醉后，心脏采血，离心，取血清行生化检测。用Beckman CX7全自动生化分析仪检测血清总蛋白（total protein, TP）、白蛋白（albumin, Alb）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein, HDL）、低密度脂蛋白（lowdensity lipoprotein, LDL）、肌酐（creatinine, Cr）及血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）。 1.4 肾组织病理形态学观察 实验第7周末处死动物，取部分新鲜肾组织分别行光镜和电镜观察。光镜观察：肾组织用4%多聚甲醛溶液予以固定，酒精梯度脱水，二甲苯中透明，石蜡包埋，制成厚度2 μm的切片，行高碘酸希夫氏染色（periodic acidSchiff stain, PAS）和Masson染色，观察肾小球及肾小管间质的变化。电镜观察：肾组织用4%戊二醛固定，1%锇酸磷酸钠缓冲液后固定，丙酮梯度脱水，815环氧树脂包埋，Leica UCT超薄切片机切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色，在日立H7500透射电镜下观察。 1.5 统计学方法 采用SPSS 10.0软件进行统计学分析，计量资料用x±s表示，采用单因素方差分析。 2 结果 2.1 大鼠一般情况 正常对照组大鼠未出现死亡；辛伐他汀组大鼠于实验第6周死亡1只；模型组和柴苓归芪组于实验第7周各死亡1只，可能系感染所致，尾部的感染可能与注射部位阿霉素渗漏引起局部缺血坏死有关。 2.2 对24 h尿蛋白定量的影响 实验第2周末各组大鼠均未出现明显的蛋白尿。模型组第3周末出现蛋白尿（24 h尿蛋白定量＞100 mg），第4周末蛋白尿进一步加重，第5周末达高峰，第6、7周末蛋白尿稍减轻，其第3、4、5、6、7周末24 h尿蛋白定量与正常对照组比较均有统计学意义（P＜0.01)。辛伐他汀组和柴苓归芪组第3周末的尿蛋白定量与模型组相比虽有下降，但无统计学意义；第4、5周末尿蛋白定量明显下降，与模型组比较有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01)；第6、7周末模型组的尿蛋白定量虽有下降，但与辛伐他汀组和柴苓归芪组比较，仍有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01)。实验中，虽然柴苓归芪组24 h尿蛋白定量始终略高于辛伐他汀组，但两组比较无统计学意义。见表1。 2.3 对血清TP、Alb、BUN、Cr的影响 实验第7周末模型组的血清TP、Alb值较正常对照组明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。辛伐他汀组和柴苓归芪组血清TP、Alb值较模型组显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。柴苓归芪组血清TP、Alb值略高于辛伐他汀组，但两者比较无统计学意义。实验第7周末，模型组的血清BUN、Cr值与正常对照组比较有显著性升高（P＜0.05或P＜0.01）。辛伐他汀组、柴苓归芪组血清BUN、Cr值与模型组比较均有显著下降（P＜0.05），但辛伐他汀组和柴苓归芪组的组间比较并无统计学意义。见表2。 2.4 对血清TC、TG、HDL、LDL的影响 实验第7周末，模型组与正常对照组比较，血清TC、TG、LDL值均有升高，而HDL值则有显著下降（P＜0.01）；辛伐他汀组、柴苓归芪组与模型组比较，其血清TG、TC、LDL值均有明显降低（P＜0.05或P＜0.01），而HDL值则显著升高（P＜0.01）。柴苓归芪组血清TC、TG值稍低于辛伐他汀组，但两者比较无统计学意义。结果见表3。 2.5 肾组织病理形态学观察 2.5.1 光镜观察 正常组：肾小球及肾小管间质结构基本正常，未见病理性改变。模型组：肾小球肿大、充血，上皮细胞肿胀，系膜区呈轻度增宽，系膜细胞增生，系膜基质增多，少数肾小球呈现局灶节段性硬化；基底膜基本正常；病变肾小球周围的近曲小管上皮细胞变性肿胀，管腔变小，部分小管腔内可见蛋白管型，并有灶性小管腔扩大；间质有散在的纤维组织增生，并见有散在的或灶性炎细胞浸润。辛伐他汀组：肾小球轻度肿胀、充血，系膜区呈局灶性轻度增宽，系膜细胞及系膜基质增生较模型组轻，未见肾小球节段性硬化；基底膜正常；病变肾小球周围少数近曲小管上皮细胞变性，间质有少量的纤维组织增生及炎细胞浸润。柴苓归芪组光镜下的病理改变与辛伐他汀组基本一致。 2.5.2 电镜观察 正常组：肾小球上皮细胞、内皮细胞、基底膜结构均正常，上皮细胞足突结构清晰呈杵样并列排列于基底膜外侧；内皮细胞窗孔排列整齐；基底膜结构均匀完整；近曲小管刷状缘排列整齐。模型组：肾小球上皮细胞足突广泛融合，足突间隙消失，上皮细胞肿胀，胞浆内空泡化，并见微绒毛变性；内皮细胞窗孔排列紊乱；基底膜结构基本正常；近曲小管腔面可见大量微绒毛，绒毛根部附近可见大量空泡变性，线粒体部分嵴融合消失。辛伐他汀组：肾小球上皮细胞足突有部分融合；内皮细胞窗孔排列基本整齐；基底膜正常；近曲小管腔面微绒毛正常，根部少许空泡变性，线粒体基本正常。柴苓归芪组电镜下的病理改变与辛伐他汀组基本相似。 表1 第2、3、4、5、6、7周末24 h尿蛋白定量（略） Tab 1 24h urine protein excretion at the 2nd，3rd，4th，5th，6th and 7th weekends *P＜0.05, **P＜0.01, vs normal control group; △P＜0.05, △△P＜0.01, vs untreated group; ▲ n=9 表2 血清TP、Alb、BUN、Cr的检测结果（略） Tab 2 Test results of serum TP、Alb、BUN and Cr *P＜0.05, **P＜0.01, vs normal control group; △P＜0.05, △△P＜0.01, vs untreated group 表3 血清TG、TC、HDL、LDL的检测结果（略） Tab 3 Test results of serum TG、TC、HDL and LDL *P＜0.05, **P＜0.01, vs normal control group; △P＜0.05, △△P＜0.01, vs untreated group 3 讨论 肾病综合征（nephrotic syndrome, NS）属于中医“水肿”范畴。其形成与正气不足，气滞、血瘀、水停等有关。肺、脾、肾功能失调，肝失疏泄，三焦气化失司，水道失畅，引起水液代谢障碍。水湿停滞日久不去，可化热形成湿热壅滞，入于脉道形成瘀血内阻，湿热瘀血同阻脉络可形成高脂、高黏血症。日久正气不足，脾虚不能升清或肾虚不能藏精，或湿热困扰，或肝失疏泄，均可导致精微下泄而形成蛋白尿。肝失疏泄、脾失健运，气血生化不足而形成低蛋白血症。最终形成正气不足、气滞、血瘀、水停及湿热阻滞。治宜行气利水、清热除湿、益气活血、化瘀通络之法。柴苓归芪汤就是在此法指导下，结合现代中药药理，由柴苓汤（治疗NS水肿、蛋白尿的效方）和补阳还五汤（抗凝、降脂的效方）加减化裁而成，旨在从多方位、多靶点治疗NS。本实验中，我们用柴苓归芪汤进行干预性治疗，结果表明：柴苓归芪汤能够有效减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白，提高血浆蛋白水平，改善脂质代谢，保护阿霉素肾病大鼠的肾功能，从而促进肾脏病理损害的修复。 蛋白尿和高脂血症不仅是NS的主要临床表现，还是肾脏疾病进一步恶化的重要因素。目前大量体外研究表明，蛋白尿具有潜在的肾毒性，即尿蛋白的系膜毒性和对近曲小管的毒性作用［4］。系膜毒性主要造成系膜细胞的损伤，促进系膜细胞增生及系膜基质合成，导致肾小球硬化。对近曲小管的毒性表现为大分子蛋白进入肾小管，和小分子蛋白竞争性地被肾小管上皮细胞重吸收，蛋白质的过度增多，使溶酶体活性增加，肾小管刷状缘脱落，直接损伤了肾小管上皮细胞结构的完整性［5］。因此蛋白尿是导致肾小管间质损伤以及加速肾功能恶化的重要因素［6,7］。高脂血症导致肾损伤的可能机制为：脂质在肾内沉积，带阳电荷的脂蛋白通过中和受损部位的阴电荷，经肾小球毛细血管区到达系膜区，并进一步在系膜区沉积；沉积的脂蛋白可被活化的氧分子修饰，氧化后的脂蛋白更具细胞毒性，并可刺激系膜细胞增殖产生单核细胞趋化蛋白1，使巨噬细胞在局部聚集、浸润，使引起肾小球损伤的自由基、细胞因子及生长因子的释放增加，刺激系膜细胞增生及系膜基质增生，促进肾小球硬化的发生［8］。因此在肾小球疾病的发展过程中，控制蛋白从尿中丢失，调节脂质代谢紊乱，其意义不仅在于改善临床症状，还在于减轻其对肾小球及肾小管间质的损伤，从而延缓肾脏疾病的进展。本实验结果表明：在第3、4、5、6、7周末模型组均出现不同程度的蛋白尿，而柴苓归芪组始终低于模型组，提示柴苓归芪汤可以降低阿霉素肾病大鼠的尿蛋白。实验第7周末阿霉素肾病大鼠血清TG、TC、LDL升高，HDL降低。柴苓归芪组与模型组比较，血清TG、TC、LDL明显下降，HDL明显升高，提示柴苓归芪汤改善阿霉素肾病大鼠的脂质代谢紊乱，减轻脂质肾损伤。柴苓归芪汤中柴胡、黄芪经现代药理研究表明可减少肾小球疾病的蛋白尿，降低血脂［9～14］；柴胡、黄芪、黄芩、当归有抑制氧自由基，抗脂质过氧化的作用［12～15］；当归、地龙有降低血小板集聚、改善血液循环的作用，可改善高脂血症引起的高凝、高黏状态［15,16］。地龙、茯苓具有利尿消肿的作用［17,18］，可改善低蛋白血症引起的水肿。方中诸药通补并用，标本兼治，共同达到治疗NS的目的。可能正是由于柴苓归芪汤具有减少尿蛋白、改善脂质代谢紊乱的作用，从而减轻了蛋白尿和高脂对肾脏的损伤，使得阿霉素肾病大鼠的肾功能和肾组织的病理损害得以改善。实验结果显示：模型组的BUN、Cr含量显著高于正常对照组，而柴苓归芪组则明显低于模型组。模型组光镜下可见部分肾小球呈局灶节段性硬化，近曲小管上皮细胞变性肿胀，部分小管腔内可见蛋白管型，间质可见散在的纤维增生；电镜下肾小球上皮细胞足突广泛融合。柴苓归芪汤组未出现球性硬化，小管间质的病变也明显减轻，肾小球上皮细胞足突只有少量融合。提示柴苓归芪汤对阿霉素肾病大鼠的肾功能具有保护作用，可延缓肾功能损害的发生。 本实验中我们选用辛伐他汀作为对照，辛伐他汀属于3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，是国际上公认的降脂药物，该类药为抑制TC合成的限速酶，主要是通过与3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶的竞争性抑制作用，抑制内源性TC的形成，刺激低密度脂蛋白受体的产生，加强血浆中LDL的清除，促进LDL的分解从而降低LDL［19,20］。最近的研究发现：他汀类药物除降脂的肾脏保护作用外，还有非依赖降脂的肾脏保护作用，其中包括抗脂质过氧化、减少蛋白尿、减轻系膜细胞产生、减少单核巨噬细胞浸润、减轻细胞外基质扩展，从而改善肾功能，延缓肾脏损害［21,22］。实验结果表明：柴苓归芪汤和辛伐他汀均能减轻阿霉素肾病大鼠蛋白尿，调节脂质代谢紊乱，改善肾功能，延缓肾脏病理进程的进展。柴苓归芪汤是否和辛伐他汀有相同的作用机制，尚待进一步研究。 ［参考文献］ 1 谭永淑, 王 峥. 阿霉素诱发大鼠肾病的病理观察［J］. 临床与实验病理学杂志, 1992, 8(3): 224225. 2 从玉文, 刘耀明, 陈家佩. 蚓激酶的研究进展［J］. 中国生化药物杂志, 2000, 21(3): 159161. 3 张国平, 钱睿哲, 杨诗春, 等. 蚓激酶抑制血小板集聚的观察［J］. 中华医学杂志, 1998, 78(5): 394395. 4 董光富. 蛋白尿和慢性肾功能衰竭进展关系研究近况［J］. 国外医学・泌尿系统分册, 1998, 18(4): 165168. 5 牛建英. 蛋白尿损害肾脏的机制及其干预措施［J］. 肾脏病与透析肾移植杂志, 2003, 12(1): 6669. 6Burton C, Harris KP. The role of proteinuria in the progression of chronic renal failure［J］. Am J Kidney Dis, 1996, 27(6): 765775. 7Praga M, Morales E. Renal damage associated with proteinuria［J］. Kidney Int Suppl, 2002, (82): 4246. 8Wheeler DC, Bernard DB. Lipid abnormalities in the nephrotic syndrome: causes, consequences and treatment［J］. Am J Kidney Dis, 1994, 23(3): 331346. 9 张桂贤, 常敏毅. 柴胡成分抗肾炎效果的研究［J］. 国医论坛, 1992, 7(2): 4547. 10 邵淑丽. 柴胡、姜黄对小白鼠实验性高脂血症的预防作用［J］. 中医药学报, 2002, 30(4): 59. 11 梁 云, 崔若兰. 柴胡皂苷d治疗抗肾小球基膜型肾炎的实验研究［J］. 第二军医大学学报, 1999, 20(7): 416419. 12 徐安平, 崔若兰. 柴胡在肾小球疾病中治疗作用的研究进展［J］. 国外医药・植物药分册, 1996, 11(2): 5558. 13 汪德清, 沈文梅. 黄芪有效成分对氧自由基清除作用的ESR研究［J］. 生物化学与生物物理进展, 1996, 23(3): 260262. 14 房 喻, 胡道道, 李晓军. 黄芩甙及其铜（Ⅱ）、锌（Ⅱ）配合物对超氧自由基的清除作用［J］. 生物化学杂志, 1991, 7(6): 753756. 15 谢 玲, 杨凌红, 李晓惠. 当归药理作用研究进展［J］. 中医药研究, 2000, 16(6): 5658. 16 吴 畏, 阳崇德, 刘才平. 地龙药理作用的研究新进展［J］. 中药药理与临床, 2002, 18(2): 4849. 17 黎 莉, 甘 明, 黎祥胜, 等. 地龙类药材药理作用比较［J］. 中药材, 1997, 20(7): 361363. 18 冯文茹, 孙向军, 胡人杰. 中药茯苓的药理研究及临床应用［J］. 天津医科大学学报, 1995, 1(2): 9597. 19Yamashita T, Kawashima S, MiwaY, et al. A 3hydroxy3methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor reduces hypertensive nephrosclerosis in strokeprone spontaneously hypertensive rats［J］. J Hypertens, 2002, 20(12): 24652473. 20Elisaf M, Mikhailidis DP. Statins and renal function［J］. Angiology, 2002, 53(5): 493502. 21Oda H, Keane WF. Recent advances in statins and the kidney［J］. Kidney Int Suppl, 1999, （71）: S25. 22Yoshinura A, Nemoto T, Sugenoya Y, et al. Effect of simvastatin on proliferative nephritis and cellcycle protein expression［J］. Kidney Int Suppl, 1999, （71）: S8487 |
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