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高效液相色谱荧光法测定人体内血浆中氟伐他汀的浓度           ★★★ 【字体：小 大】
高效液相色谱荧光法测定人体内血浆中氟伐他汀的浓度
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-1    
作者：易萍，刘世坤，徐海平，邹霞
【关键词】  氟伐他汀；血浆；色谱法；高压液相；荧光检测
  　　［摘要］  目的  建立一种简便、快速的高效液相色谱（HPLC）荧光检测法测定人体内血浆中氟伐他汀的浓度。方法  采用Kromasil C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温40 ℃，流动相为13 mmol/L溴化四丁基铵-乙腈（51∶49），流速为1.0 ml/min，荧光检测激发波长305 nm，发射波长405 nm。结果  氟伐他汀在1~1000 μg/L范围内线性关系良好（r=0.9994）。日内和日间RSD均低于10%。结论  该方法灵敏度高、快速、简便、无杂质干扰，适合于氟伐他汀的体内分析和人体药动学研究。
        Determination of fluvastatin sodium concentration in human plasma by high performance liquid chromatography with fluorescence detection
    ［Abstract］  Objective  To establish a simple and rapid method for determination of fluvastatin in human plasma by HPLC.with fluorescence detection.Methods  Chromatographic column was KromasilC18（4.6 mm×150 mm,5 μm）and 40 ℃ of column temperature.The mobile phase consisted of 13 mmol/L Tetrabutylammonium chloride-acetonitrile（51∶49）with a flow rate of 1.0 ml/min.A fluorescence detector was set at λcx305,λcm405nm.Results  The lower limit of qualification was 1 μg/L.The calibration curve was in good linearity over the range of 1~1000 μg/L（r=0.9994）.The intar-day and inter-day RSD were less than 10%.Conclusion  The method is sensitive,rapid and suitable for the study of pharmacokinetics of fluvastatin.
    ［Key words］  fluvastatin sodium;plasma;chromatography;high pressure liquid;fluorescence detection
    氟伐他汀（fluvastatin）是胆固醇合成早期阶段限速酶HMG-CoA还原酶的抑制剂。它能降低血浆中总胆固醇、低密度脂蛋白和载体蛋白B的水平，中等程度降低甘油三酯的水平，同时还能提高高密度脂蛋白-胆固醇水平。它主用于饮食不能完全控制的高胆固醇血症。国外已有氟伐他汀血药浓度测定的报道［1~3］，但尚未见国内的有关报道。为此，笔者结合国外文献建立了高效液相荧光检测法测定人体内血浆中氟伐他汀的浓度，用于研究氟伐他汀的药动学。
    1  材料与方法
    1.1  主要仪器  岛津LC-20A高效液相色谱仪；CBM-20Alite系统控制器；LC-20AT输液泵；CT0-20A柱温箱；SIL-20A自动进样器；10A-RF荧光检测器；LC solution工作站。
    1.2  药品与试剂  氟伐他汀钠对照品（北京诺华制药有限公司，纯度99.7%）；氟伐他汀钠胶囊（商品名：来适可，北京诺华制药有限公司，规格40 mg/粒，批号05019）；乙腈（色谱纯，Tedia公司）；叔丁基甲醚（色谱纯，美国Fisher公司）、溴化四丁基铵等为分析纯；水为二次蒸馏水。
    1.3  色谱条件  色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）；柱温：40 ℃，流动相：13 mmol/L溴化四丁基铵-乙腈（51∶49）；流速：1.0 ml/min；荧光检测激发波长305 nm，发射波长405 nm；进样量：40 μl。
    1.4  样品的处理  取待测血浆0.5 ml于10 ml离心管中，加入0.5 ml磷酸盐缓冲液（pH=3.0）混匀，再加入叔丁基甲醚4 ml，涡漩3 min，静置5 min后4000×g离心5 min，定量吸取3 ml有机相转至另一管中，室温N2吹干，残渣用100 μl流动相溶解，取上清进样40 μl。
    2  结果
    2.1  色谱图  见图1。A、B、C分别为空白血浆、空白血浆+氟伐他汀标准品、受试者服药后血浆供试品的荧光色谱图。氟伐他汀的保留时间为8.0 min，血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定。
    2.2  标准曲线制备  用空白血浆将氟伐他汀标准溶液（100 mg/L）配制成不同浓度（1，2.5，5，10，25，50，100，250，500，1000 μg/L）的标准液，按上述样品处理方法操作后测定。以氟伐他汀峰面积（y）与浓度（x）进行线性回归，得回归方程为y=105591x-8984,（r=0.9994,n=10），线性范围为1~1000μg/L，最低定量限为1 μg/L。
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