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经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞NF           ★★★ 【字体：小 大】
经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞NF
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-1    
作者：王晖，杨志健，黄峻，朱铁兵，王连生，曹克将
【关键词】  ,外周血单核细胞
    Activation of NFκB induced by coronary stent placement in peripheral blood mononuclear cells
　　【Abstract】 AIM:  To investigate the effect of coronary stenting on the activation of NFκB in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). METHODS:  Fifty patients were classified into two groups: 28 patients in stenttreatment group and 22 in coronary angiography (CAG).  The levels of NFκB activity preprocedural and during the days after stent placement were determined using electrophoresis mobility shift assay (EMSA). RESULTS:  The levels of NFκB activity in stenttreatment group from preprocedural to the 4th hour, 1st, 2nd and 3rd days after stent placement were (1.17±0.25) fold, (1.23±0.30) fold, (2.00±0.45) (2.49±0.46) fold and (2.25±0.4) fold respectively. Significantly increased levels of NFκB activity were seen in the 1st, 2nd and 3rd days (P<0.05). No alteration of NFκB activity was seen in CAG group. CONCLUSION:  Increased level of NFκB activation in PBMC may be involved in the stent injury of the targeted vessel wall.
　　【Keywords】 peripheral blood mononuclear cells; NFkappa B;  stents
　　【摘要】 目的： 探讨经皮冠状动脉内支架植入术是否激活外周血单核细胞(PBMCs)中核因子κB (NFκB)活性的表达. 方法： 选择NFκB基线时呈阴性反应的稳定型心绞痛患者50例，其中单纯造影组22例，支架治疗组28例. 分别于冠脉造影或支架术后4 h及术后第1， 2， 3 d留取全血抗凝标本；采用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)测定PBMCs 中NFκB的活性. 结果： 支架术程中NFκB活性呈动态变化，于术后1 d  NFκB活性显著性升高呈阳性反应，术后2 d NFκB活性达峰值，术后3 d NFκB活性有下降，但仍保持在高水平表达状态. 而造影组患者则没有NFκB活性变化. 结论： 冠状动脉内支架术激活外周血单核细胞NFκB活性.
　　【关键词】  外周血单核细胞；NFκB；支架
　　0引言
　　经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)能迅速开通罪犯血管，恢复心肌供血、挽救心肌、挽救生命；但对于不同病例仍有30%~50%的再狭窄率［1］. 病理研究发现支架内再狭窄发生率与PCI术后靶血管处异常增多的炎症介质和炎细胞浸润相关［2］. 而细胞因子、趋化因子等炎症介质的合成、分泌受核因子κB (NFκB)等转录因子调控［3］. 因而了解PCI术程中NFκB的活性变化，可能对阐明PCI的炎症机制具重要意义. 为此，我们探讨了冠状动脉内支架术血管急性损伤期周围血单核细胞(PBMC) NFκB的活性变化.
　　1对象和方法
　　1.1对象
　　选择在我院冠心病诊治中心行冠状动脉造影术或支架术的稳定型心绞痛患者50例. 按是否行冠状动脉内支架植入术分为支架治疗组和单纯造影组. 所有患者于冠状动脉造影术前NFκB 活性测定呈阴性. 排除标准：  ① 急性心肌梗死、不稳定性心绞痛伴肌钙蛋白水平升高；② 严重的心脏瓣膜疾病及风湿、类风湿活动；③ 心肌炎，心肌病，明显的肝脏和肾脏疾病伴肝或肾功能不全；④ 近期感染性疾病.
 
　　1.2方法
　　1.2.1冠状动脉造影和支架术采用Judkins法经右股动脉按常规方法进行. 术前24 h口服氯吡格雷（波立维）300 mg. 支架术前即刻静脉推注或股动脉套管内注射肝素6000～8000 U(按公斤体质量计算)；本研究中所有患者均经球囊预扩张后植入支架. 手术成功标准：残余狭窄＜30%，TIMI 3级.
　　1.2.2血液标本收集分别于冠状动脉造影和支架术术前，术后即刻，4 h，1， 2， 3 d留取全血抗凝标本，进行PBMC提取.
　　1.2.3PBMC NFκB活性测定
　　1.2.3.1主要试剂［γ32P］ ATP放射性摩尔活度: 185 PBq/mol，体积活度370 GBq/L，2  wk内完成实验(北京亚辉生物医学工程公司). 凝胶电泳迁移率实验试剂盒(Gel shift assay core system)，NFκB consensus oligo及T4多核苷酸激酶(Promega公司提供).
　　1.2.3.2核蛋白提取及浓度测定参照Schreiber等［4］方法. 简述如下：初步提取的PBMCs 经PBS洗涤后，加缓冲液A(buffer A)，冰上静置20 min，加入NP40裂解离心，取沉淀再加缓冲液C(buffer C)悬浮混匀，高速离心收集上清液中的核蛋白并进行蛋白浓度测定.
 
　　1.2.3.3凝胶电泳迁移率实验 (EMSA)① 在T4激酶作用下，37℃将［γ32P］ATP标记于NFκB寡核苷酸上；② 加入核蛋白提取物(10 g/L)室温20℃下孵育20 min；③ 40 g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳约2 h；④ -70℃X光片增感屏放射自显影36 h.
 
　　1.2.3.4半定量分析凝胶图像扫描系统对显影照片进行光密度扫描，以arbitrary units(AU)表示结果. AU=实验组/空白对照组光密度. 本实验以>2AU判定为阳性结果，否则为阴性结果.
　　1.2.4cTnI水平测定采用双夹心ELISA法. 正常参考值： cTnI: 0～7 μg/L.
 　　统计处理： 用SPSS 10.0软件包进行统计. 计量资料以x±s表示. 数据采用重复测量的方差分析. P<0.05认为差异有统计学意义.
　2结果
　　2.1临床资料分析本研究人群共计50例. 其中支架治疗组28（男24，女4）例，年龄(61.7±5.2)岁；单纯造影组22（男16，女6）例，年龄(62.5±4.2)岁. 两组患者的年龄、性别构成无差异. 冠心病危险因素高血压、糖尿病和脂质代谢异常的发生率支架组和造影组也无差异；造影提示的靶血管及病变血管QCA参数最小管腔直径、参照血管直径等方面两组也无差异.
　　2.2NFκB活性在支架术程中的动态变化单纯造影组术前，术后4 h, 1， 2， 3 d各时相NFκB活性AU比值无差异；而支架治疗组上述各时相NFκB活性AU比值有明显差异（Fig 1, Tab 1）. NFκB活性于支架术后4 h无变化（P>0.05），于术后1 d  PBMCs 中NFκB活性升高呈阳性反应，术后2 d  NFκB活性达峰值，术后3 d NFκB活性有所下降，但仍保持在高水平表达状态. 而造影组患者则没有NFκB活性变化. 所有患者均未出现支架术后cTnI异常升高.表1单纯造影组和支架治疗组术前后NFκB活性水平（略）
　　3讨论
　　
　　血管内膜的增殖是支架术后再狭窄的主要病理机制［5］，而支架植入触发的局部炎症反应可能是其始动因素之一. 多项临床研究发现PCI围手术期冠状动脉循环中有细胞因子、黏附分子等炎症介质的释放，且其释放量与支架术后远期再狭窄等预后相关［6］. 进一步的研究发现细胞因子、黏附因子及生长因子的分泌与细胞内NFκB的表达紧密关联. NFκB是广泛存在于细胞质中的快反应转录因子，细胞处于静息状态时，与其抑制性蛋白IκB结合呈非活性状态. 它可被细胞因子、蛋白激酶C激活剂、氧化剂以及脂多糖、紫外线等激活. NFκB的激活能引起一系列基因的表达增加，这些基因的产物参与炎症和免疫反应. 反之由NFκB调节的产物，又能激活NFκB. 这意味着存在着一个能放大且延续炎症反应的复杂的调节环路［7］.
 　　
　　我们发现支架术对血管壁的机械损伤，可引起外周血单核细胞NFκB活性的表达，其活性在术后第2日达峰值. 而支架术前、术后cTnI水平均维持较低水平，无显著性变化，表明支架术后NFκB活性的增加不是心肌坏死所致，而可能是支架术后局部炎性反应的一种表现.  我们推测可以通过降低PTCA和/或支架术前、后的炎症反应，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖，预防再狭窄的发生.
　　【参考文献】
　　［1］ 韩雅玲, 王效增, 康建，等. 血管球囊损伤后内膜增生及血管重塑对再狭窄的影响［J］. 第四军医大学学报, 2004;25(9):788-790.
　　Han YL, Wang XZ, Kang J, et al. effects of intimal hyperplasia and vascular remodeling on vascular restenosis after balloon injury［J］. J Fourth Mil Univ, 2004;25(9):788-790.
　　［2］ Bennett MR.Instent restenosis: Pathology and implications for the development of drug eluting stents ［J］. Heart, 2003; 89(2): 218 - 224.
　　［3］ Acquisto FD, May MJ, Ghosh S. Inhibition of  nuclear factor kappa B (NFB): An emerging theme in antiinflammatory therapies ［J］. Mol Interven, 2002;2:22-35.
　　［4］ Schreiber E, Matthias P, Muller M, et al. Rapid detection of octamer binding proteins with “miniextracts” prepared from a small number of cells ［J］. Nucleic Acids Res, 1989;17:6419.
　　［5］ 栾荣华, 贾国良, 李伟, 等. cmyc基因mRNA核酶对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用［J］.  第四军医大学学报, 2003; 24(6):517-521.
　　Luan RH, Jia GL, Li W, et al. inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation by specific cmyc mRNA cleaving hammerhead ribozyme ［J］. J Fourth Mil Univ, 2003;24(6):517-521.
　　［6］ Hojo Y, Ikeda U, Katsuki T, et al. Interleukin 6 expression in coronary circulation after coronary angioplasty as a risk factor for restenosis ［J］. Heart, 2001;84:83-87.
　　［7］ Monaco C, Andreakos E, Kiriakidis S, et al. Canonical pathway of nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflammatory and prothrombotic responses in human atherosclerosis ［J］. PNAS, 2004; 101(15):5635-5639
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