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形态学分型困难的白血病24例免疫分型           ★★★ 【字体：小 大】
形态学分型困难的白血病24例免疫分型
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-1    
作者：孙英慧，马东初，蔺迪，于卉影，时葆赋,陆岩
【关键词】  白血病；免疫分型；流式细胞仪
　　Immunophenotyping in 24 patients with leukemia in comparison with morphotyping
　　【Abstract】 AIM: To study the immunophenotyping with flow cytometry rapidly and efficiently in 24 patients with acute or chronic leukemia. METHODS: Immunophenotyping was performed by doublelabeling with different antibodies conjugated with FITC and PE and analyzed with multiparameter flow cytometry for 24 patients with acute or chronic leukemia, which were difficult to be diagnosed clinically by morphology. RESULTS: ① Nine patients clinically diagnosed as chronic lymphocytic leukemia were immunophenoyped as B lymphocytic leukemia by FCM; ② Five patients clinically diagnosed as acute lymphocytic leukemia (L2) were immunophenotyped as different leukemia  groups by FCM, including 1 patient with B lymphocytic leukemia, 2 with T lymphocytic leukemia (one of them with erythrocytic abnormity), 1 with undifferentiated leukemia, and 1 with lymphocytic leukemia expressing both B and T cell antigens; ③ Five patients clinically diagnosed as acute nonlymphocytic leukemia were immunophenotyped by FCM as 2 patients with myeloid leukemia, 3 patients with erythroleukemia (M6); ④ One patient clinically diagnosed as MDS with myelofibrosis was immunophenotyped as M6 by FCM; ⑤ Among 4 patients who were suspected as both myeloid and lymphoidlineage phenotype, only 2 were diagnosed as double myeloid and lymphoid markers positive phenotype. The coincidence between immunophenotype ane FAB phenotype was 79.2%. CONCLUSION: Immunophenotyping by FCM may retrieve the faults of FAB phenotyping, providing important evidences for clinical diagnosis and guiding treatment individually.
　　【Keywords】 leukemia; immunophenotype; flow cytometry
　　【摘要】 目的： 应用流式细胞仪对24例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型，以指导临床化疗. 方法： 采用单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术（FCM），分型根据抗体积分系统，并与FAB分型进行比较. 结果： ① 9例临床诊断慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病；② 5例临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2）的患者经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病；2例为T淋巴细胞性白血病，且1例伴红系异常改变； 1例为未分化型白血病；1例为淋巴细胞白血病B，T双表达；③ 5例急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病；3例为红白血病（M6）；④ 1例MDS伴骨髓纤维化经FCM免疫分型确诊为M6；⑤ 4例疑似粒淋双表型白血病经FCM免疫分型确诊为粒淋双表型白血病.  免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 结论： 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析，可以弥补FAB分型的不足，为临床诊断提供重要依据，并为白血病治疗措施的个体化提供依据.
　　【关键词】 白血病；免疫分型；流式细胞仪
　　0引言
　　白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型.  我们对24例临床确诊为急慢性白血病，但形态学分型较困难的患者，应用流式细胞仪对其进行了免疫分型，并与FAB分型进行了比较.
　　1材料和方法
　　1.1材料白血病患者的骨髓24（男11，女13）例，年龄17～67（平均44）岁. 所用单抗包括FITC标记的MsIgG1,CD10,CD20,CD3,CD7,HLADR,CD41及Glycophorin A；藻红蛋白（PE）标记的MsIgG1,CD19,CD22,CD5,CD33,CD13及CD34，均购自美国BD公司.
　　1.2方法骨髓经肝素抗凝后，PBS稀释5倍，使用Ficoll(1077 g/L)分离骨髓单个核细胞，PBS洗涤2次，以2×1010/L悬于PBS中，按文献［1］方法进行标记. 以标记FITC的抗钥孔嘁血蓝素mAbIgG2a和标记PE的抗钥孔嘁血蓝素mAbIgG1处理细胞作为阴性对照. 应用美国BD公司的FACSort流式细胞仪进行检测，每个样本收集5000～10 000个细胞，Cellquest软件分析其抗原表达情况.
　　2结果
　　2.1抗原表达B淋巴细胞性白血病抗原表达为：CD19,20,22,HLADR; T淋巴细胞性白血病伴红系异常改变阳性抗原表达为：CD5,CD3, CD7,HLADR，Glycophorin A（63.1%）;髓系白血病抗原表达为：CD13,CD33;红白血病（M6）抗原表达为：Glycophorin A［（96.4±5.6）%］,CD34和CD41均为阴性；淋巴细胞白血病B,T双表达阳性抗原为：CD19,CD10,CD20,CD3（89.3%）, CD13,HLADR; 粒淋（B）双表型白血病抗原表达为:CD19,CD10,CD20,CD22,CD33,CD13,HLADR;粒淋（T）双表型白血病抗原表达
为:CD5,CD3,CD33,CD7,CD13,HLADR（表1）.
　　2.2形态学和免疫分型临床诊断慢性淋巴细胞白血病9例经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病；临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2）的5例经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病；2例为T淋巴细胞性白血病，且1例伴红系异常改变； 1例为未分化型白血病；1例为淋巴细胞白血病B,T双表达；急性非淋巴细胞性白血病5例经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病；3例为红白血病（M6）； MDS伴骨髓纤维化1例经FCM免疫分型确诊为M6；疑似粒淋双表型白血病4例经FCM免疫分型确诊为粒淋双表型白血病. 免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%（表2）.
　　表1流式细胞仪免疫分型（略）
　　ND+：抗原表达量>20%. -：抗原表达量<20%. ND:未测.
　　表2形态学分型和FCM免疫分型（略）
　　3讨论
　　白血病的主要类型有源自未成熟T或B淋巴细胞的ALL，源自未成熟骨髓细胞的AML，源自成熟B淋巴细胞的CLL，源自粒细胞前身的CML. 准确的诊断可以指导临床选择最有效的治疗手段. 一般认为形态学鉴定细胞性质准确率在60%，而免疫学分型可超过90%，尤其在下列情况下，应用单克隆抗体对白血病进行免疫分型更为必要. 用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病［2-3］. 如：未分化型白血病和混合细胞性白血病；形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记；部分髓系白血病；慢性淋巴细胞白血病；微小残留白血病.
　　目前，临床对急慢性白血病的诊断主要是根据对原始血细胞的形态学与细胞化学染色的分析来诊断. 随着免疫学单抗技术的不断提高和对白细胞抗原研究的日趋深入，学者们认识到有些抗原特异性强，很少发生交叉表达，如CD3,CD22,CD79,MPO等，有些曾被认为属于某一系列特异性的抗原实际在其他系列的某一阶段或特殊情况下也可能出现［2,4］,我们对24例临床形态学及细胞化学染色难以分型的急慢性白血病，采用流式细胞术进行了免疫分型. 其中，1例急性淋巴细胞白血病经FCM分型确诊为淋巴细胞白血病T,B双表达， 1例临床诊断急淋L2并疑似粒淋双表型白血病的患者，经FCM分型确诊为T淋巴细胞性白血病伴红系异常改变，即淋红双表；以上两例经FCM分型的白血病在国内尚未见报道；经FCM分型确诊为M6的4例白血病，临床无1例疑似M6诊断；而4例疑似粒淋双表型白血病经FCM分型均确诊为粒淋双表型白血病；免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 与其他学者报告的83.9%相近［5］. 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析不仅可以有效地支持临床诊断，还可以弥补FAB分型的不足，为临床诊断提供重要依据. 此外，免疫分型还可以提示预后，监测病程的发展、疗效，进行微小残留白血病的检测，从而为临床预测白血病复发，选择个体化治疗方案提供重要的依据.
　　【参考文献】
　　［1］ Ma DC, Sun YH, Zuo W, et al. CD34+ cells derived from fetal liver contained a high proportion of immature megakaryocytic progenitor cells［J］. Eur J Haematol,2000,64:304-314.
　　［2］ 张之南，沈悌. 血液病诊断及疗效标准［M］. 2版. 北京：科学出版社，1998：188，208，214.
　　［3］ Bene MC, Castoldi G, Knapp W, et al. Proposals for the immunological classification of acute leukemia［J］. Leukemia, 1995, 9:1783-1786.
　　［4］ Jennings CD, Foon KA. Recent advances in flow cytometry: application to the diagnosis of hematologic［J］. Blood, 1997, 8: 2863-2891.
　　［5］ 王贤军, 金文君. 68例成人白血病免疫分型特点分析［J］. 中国肿瘤, 2004,5:332-334
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