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仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性           ★★★ 【字体：小 大】
仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性
作者：佚名    论文来源：本站原创    点击数：    更新时间：2008-10-4    
【关键词】  ,胰腺肿瘤
    Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic characteristics
　　【Abstract】AIM: To establish an orthotopic model of hamster pancreatic cancer and to analyze its biologic characteristics. METHODS:  Pancreatic cancer cell line pDHAM1 of hamster was inoculated under pancreatic membrane. At 7th, 14th, 21st, and 28th day, a group of 10 animals were sacrificed to observe the growth of orthotopic cancer, lymph nodes metastasis, liver metastasis and the quantity and quality of ascites. RESULTS:  Orthotopic model of hamster pancreatic cancer had a high survival rate (95%) and grew rapidly. The orthotopic tumors were measured (16±6), (173±44), (369±87), (974±226) mm3 respectively at  the 7th, 14th, 21st and 28th day. At  the 21st day, cancer cells were observed in lymphatic capillaries  and metastasis in some lymph nodes and hydremic ascites was detected. At  the 28th day, the positivity rate of lymph nodes and the amount of bloody ascites increased. Liver metastasis was detected in some of the hamsters. CONCLUSION:  The establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer cells pGHAM1 is simple and easily copied, and  maintains the biologic characteristics of pancreatic carcinoma, which is an ideal research model of pancreatic carcinoma.
　　【Keywords】 pancreatic neoplasms; disease models, animal; mesocricetus
　　【摘要】目的： 建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性. 方法： 将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1接种于仓鼠胰腺背膜下，分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只，肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移，同时观测腹水量. 结果： 仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%，生长迅速. 接种后第7， 14， 21， 28日原位肿瘤大小分别为（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） mm3. 第21日，毛细淋巴管内可见癌细胞团，部分淋巴结有癌细胞转移，可见少量淡血性腹水. 第28日，淋巴结阳性率进一步增加，可见血性腹水，量明显增多；部分仓鼠发生了肝转移. 结论： 仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM1原位模型建立方法简便，易复制，而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性，是理想的胰腺癌研究模型.
 
　　【关键词】 胰腺肿瘤；疾病模型，动物；金仓鼠
　　0引言
　　胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的肿瘤［1］. 其原因是胰腺癌发病隐匿，很难早期诊断，而即便早期诊断，部分患者也已经发生肝脏转移、腹膜播散或者局部复发［2］. 基于为胰腺癌研究提供一个肿瘤的试验系统目的，已有大量胰腺癌动物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在肿瘤研究方面，由于裸鼠没有正常的免疫系统，其发病机制可能与人有所不同［3］. 而叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人相似. 我们拟建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　雌性叙利亚金黄仓鼠40只，4～5周龄，纯近交系，体质量40～50 g，购自中国兰州生物制品研究所. 饲养条件：温度（22±3）℃，相对湿度为（40±5）%，光/暗周期为12 h/12 h，按照标准食物喂养，自由饮水；DMEM培养液为Gibcol BRL产品；胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司.
　　1.2方法
　　1.2.1仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺诱导叙利亚金黄色仓鼠胰腺导管癌［4］. 肿瘤组织用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套针植入仓鼠肩胛区皮下，6～8 wk后处死动物，切除肿瘤自治后反复继代种植，第8次种植后切除肿瘤组织，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37℃下EDTA处理10 min, 1000 r/min离心10 min，收集细胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并加 100 U/L青霉素链霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L两性霉素B，反复传代培养60代，建立pGHAM1细胞株.
 
　　1.2.2仓鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1细胞株于DMEM培养液中稳定传代5~6代. 观察细胞增殖旺盛时终止培养，用无血清DMEM培养液制备细胞悬液，调整细胞密度至1×1010/L，备用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠，取腹部正中切口，牵出胰腺，于脾门较宽大处胰腺背膜下注射1×106/L  PGHAM1细胞悬液后常规关腹. 于术后7, 14, 21, 28 d分别剖杀10只. 切除原位肿瘤，用测径器测量肿瘤大小，按公式V=π/6×长×宽×高计算肿瘤体积，同时观察腹水的质与量、有无淋巴结、大网膜、壁层腹膜及肝脏转移.
 
　　1.2.3病理学检查切除大网膜，平铺在蜡片上，“卷席法”处理大网膜标本；40/L甲醛固定原位肿瘤、壁层腹膜、肝脏及可疑淋巴结，石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察.
　2结果
　　2.1原位肿瘤及转移情况接种后第7日，可见胰内原发灶大小（16±6） mm3,侵至背膜，10只仓鼠中有5只管状斑处有癌细胞团；壁腹膜镜检显示间皮细胞部分正常（Fig 1A），而部分间隙增宽；肝脏及淋巴结未见转移，无腹水. 第14日，胰腺内原发灶大小（173±44） mm3,侵至背膜；10只仓鼠中9只管状斑处可见癌细胞团，且较原来增大；壁腹膜间皮细胞开始增生脱落（Fig 1B）；未检测到淋巴结和肝脏转移，未见腹水. 第21日，肿瘤进一步增大至（369±87） mm3，侵至背膜；有少量淡血性腹水；10只仓鼠管状斑均可见癌细胞团，同时毛细淋巴管中亦可见癌细胞团；壁腹膜间皮细胞大片脱落；10只仓鼠有4只检测到淋巴结转移；肝脏未见转移. 第28日，原位肿瘤大小为（974±226） mm3，与周围脏器或组织粘连（Fig 1C）；腹水呈血性，量较大；10只仓鼠有1只死亡，8只检测到淋巴结转移；5只肝脏表面出现大小较一致的多发转移结节.
　　2.2病理学特征原位移植瘤呈圆形或椭圆形，表面凹凸不平，外观呈粉红色（Fig 1C），切面呈灰白色，部分中心有坏死，肿瘤组织质地较脆；镜下可见肿瘤细胞呈多角形、梭形或不规则形，胞质淡染，胞核大而圆，异形性明显，核分裂相多见，肿瘤细胞结节状生长，排列成实性巢状，内有小的血窦，无腺腔样结构，与低分化胰腺腺癌一致（Fig 1D）. 转移肝脏表面可见多发结节，部分已经发生融合（Fig 1E）；镜下可见肝小叶结构遭破坏，取而代之的为癌细胞团，癌细胞特征与胰腺原位肿瘤细胞特征一致（Fig 1F）.
　　3讨论
　　近年来，胰腺癌的发病率在世界范围内呈明显上升趋势［5］. 同时，也是我国人口死亡的十大恶性肿瘤之一. 由于其恶性度高，发病隐匿，易早期转移，加上对放化疗不敏感等特性，使得即使成功地进行了手术切除，术后5 a生存率也不到20%［6，7］.
　　裸鼠是最多用来建立肿瘤模型的动物，由于裸鼠缺乏胸腺，不具备T细胞免疫力，故对异种移植不产生排斥反应，成活率高，容易建立胰腺癌动物模型［8］. 但是，由于其缺乏免疫功能，使得裸鼠胰腺癌模型的发病机制可能与人有所不同. 除此之外，许多裸鼠胰腺癌模型是将癌细胞接种在皮下建立的，它的优点是便于观察，但是这样做却改变了解剖与生理条件. 由于裸鼠胰腺癌模型存在以上不足，因此它并不是最理想的研究模型.
　　叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人有相似之处［3］. 例如，人大网膜上广泛分布着管状斑，网膜上的管状斑是腹腔淋巴系统的末梢吸收装置，与毛细淋巴管相连，在生理情况下，其主要功能是吸收腹水和腹水中的有形成分［9］. 而当腹水中有癌细胞时，可能就会被网膜管状斑吸收，导致肿瘤的早期淋巴转移和随后的血行转移. 仓鼠网膜上的管状斑与人的大网膜上的管状斑解剖结构相似.
　　我们利用高恶性度的仓鼠胰腺癌细胞株建立的胰腺癌原位模型，经过3～5 d潜伏期后逐渐增大；第21日，镜下可检测到淋巴结转移；第28日，部分肝脏表面有大小较一致的转移结节. 但是在淋巴结转移之前，首先检测到的是网膜管状斑有癌细胞团，随后毛细淋巴管中可检测到癌细胞团，最后才检测到淋巴结转移. 这一现象说明网膜管状斑与胰腺癌的转移关系密切. 该模型的特点是潜伏期短、生长迅速、转移早且转移率高，同时还保持了胰腺癌的生理和解剖特性. 因此，仓鼠胰腺癌原位模型是体内研究的理想模型.
　　【参考文献】
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　　［2］ Matsushita A, Onda M, Uchida E, et al. Antitumor effect of a new selective matrix metalloproteinase inhibitor, MMI166, on experimental pancreatic cancer ［J］. Int J Cancer, 2001;92(3):434-440.
　　［3］ Yamamura S, Onda M, Uchida E. Two types of peritoneal dissemination of pancreatic cancercells in a hamster mode ［J］. Nippon Ika Daigaku Zasshi, 1999;66(4):253-261.
　　［4］ Yanagi K, Onda M, Uchida E. Effect of angiostatin on liver metastasis of pancreatic cancer in hamsters ［J］. Jpn J Cancer Res, 2000;91(7):723-730.
　　［5］ Hiroi M, Onda M, Uchida E, et al. Antitumor effect of N［3,4dimethoxycinnamoyl］anthranilic acid on experimental pancreatic cancer ［J］. J Nippon Med Sch, 2002;69(3):224-234.
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　　［8］ 高进，李敏民. 中国人类恶性肿瘤在免疫缺陷动物体内的模型建立及现存问题［J］. 中华肿瘤杂志,1999;21(1):69-72.
　　Gao J, Li MM. Establishment and question of Chinese malignant tumor in immunodeficiency animals ［J］. Chin J Oncol, 1999;21(1):69-72.
　　［9］  Cui L, Johkura K, Liang Y, et al. Biodefense function of omental milky spots through cell adhesion molecules and leukocyte proliferation  ［J］. Cell Tissue Res, 2002;310(3):321-330
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