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| 壳聚糖和尿囊素预防外科术后腹腔粘连效果的观察 | |||||
作者：佚名 论文来源：本站原创 点击数： 更新时间：2008-9-30  |
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【关键词】 粘连；壳聚糖；尿囊素；兔 【Abstract】AIM: To investigate the preventive effect of chitosan and allantoin against postsurgical abdominal adhesions and to study the synergetic effects of these two drugs and discuss the mechanism. METHODS: Ninetysix rabbits were chosen to establish intestinal adhesion models, which were randomly and evenly divided into control group (group A)，chitosan treatment group (group B), allantoin treatment group (group C) and chitosan+allantoin treatment group (group D). Right after the operation, the situations of rabbits were observed. Then the rabbits were dissected to evaluate the degree of adhesions 1 and 2 weeks after the operation. Study the pathological changes under microscope. RESULTS: The models of adhesions were reliable. The adhesion degrees of group B, C and D were all significantly decreased compared with that of group A (P<0.05). Group D showed a better effect than group B and C (P<0.05). Group B, C and D could alleviate the inflammation reaction and the degree of fibrosis compared with group A. CONCLUSION: Treatment with chitosan and allantoin during operation could prevent postsurgical abdominal adhesions, and the two drugs had a synergetic effect. 【Keywords】 adhesions; chitosan; allantoin; rabbits 【摘要】 目的： 对比观察壳聚糖及尿囊素对术后腹腔粘连的预防作用，并探讨两者合用的协同作用及机理. 方法： 成年纯种家兔96只制成粘连动物模型，随机分为对照组（A）、壳聚糖组（B），尿囊素组（C）和壳聚糖+尿囊素联合用药组（D），每组24只. 观察家兔术后一般情况， 并于术后1 wk和2 wk剖腹观察其腹腔粘连情况，按程度分级，切取标本行HE染色，显微镜下观察. 结果： 粘连动物模型建立切实可靠，B，C组和D组粘连等级与A组比较均有统计学意义（P<0.05），且D组效果明显优于B，C组（P<0.05）. 病理观察联合用药组炎性反应及纤维化程度均轻于对照组. 结论： 术中应用壳聚糖和尿囊素均有预防术后腹腔粘连的作用，两者合用可产生协同作用. 【关键词】 粘连；壳聚糖；尿囊素；兔 0引言 术后腹腔粘连是外科腹部手术后的一种常见并发症，发生率高达90%以上［1］，是引起肠梗阻最常见的原因，有的甚至可引起肠绞窄而致命. 尽管广大医务工作者已认识到手术操作轻柔、减少出血和异物存留、避免粗糙创面出现、术后加强活动等可以减轻腹腔粘连，但已有的研究报道表明：采用上述办法并不能很有效地预防粘连［2］，因而探索能有效预防术后肠粘连的新方法具有重要的临床意义. 壳聚糖是一种纯天然的高分子多糖体，可被人体降解吸收，是新型的高分子抗粘连剂. 尿囊素为2,5二氧代4咪唑烷基脲. 它是尿酸的衍生物，具有促进组织细胞增生、促进溃疡及伤口愈合的作用. 本实验通过对比观察壳聚糖及尿囊素对家兔术后腹腔站粘连的预防作用，以及两者联合应用对预防术后粘连的效果，探讨壳聚糖及尿囊素联合应用对预防术后肠粘连的协同作用，为预防和减轻术后腹腔粘连提供实验依据. 1材料和方法 1.1材料成年纯种家兔96只，雌雄不限，体质量2～2. 5 kg，二级清洁动物，由第四军医大学实验动物中心提供；壳聚糖凝胶，为石家庄亿生堂医用品有限公司产品；尿囊素，为江苏华邦生化科技有限责任公司产品，用生理盐水配制成0.1 mol/L浓度的溶液备用；速眠新Ⅱ注射液，1.5 mL/支，长春军需大学兽医研究所生产. 1.2方法 1.2.1动物准备全部动物术前均禁食(不禁水)12 h，速眠新Ⅱ注射液（2 mL/kg）肌肉注射麻醉. 麻醉后仰卧位固定，剪毛消毒铺单，无菌操作下取腹正中切口，长约4 cm. 打开腹腔后找出盲肠，用组织钳取出盲肠，用显微尖镊于肠系膜对侧沿纵轴方向剥离约5 cm×2 cm大小浆膜［3］. 1.2.2实验动物分组家兔按双盲法随机分为4组，每组24只： 对照组(A组)，关腹前用生理盐水30 mL冲洗腹腔，吸弃部分液体，将盲肠放回腹腔，关腹；壳聚糖组(B组)，关腹前用壳聚糖凝胶均匀涂布于距盲端3 cm范围内的盲肠浆膜面(用量： 1 mL/只)；尿囊素组(C组) 关腹前注入尿囊素溶液30 mL；壳聚糖+尿囊素联合用药组(D组)，关腹前均匀涂布壳聚糖凝胶(1 mL/只)并注入尿囊素溶液30 mL. 1.2.3目视判断评分术后动物禁食12 h，分笼饲养，饲料为全价营养家兔颗粒饲料. 每组再随机分为2组，每组12只，分别于术后1 wk 和2 wk在麻醉下再次打开腹腔，肉眼观察并评定盲肠盲端经处理过的部位同周围肠管、系膜及腹壁的粘连情况. 在实验期间死亡的家兔也做剖腹检查. 按文献［4］的分级标准对腹腔粘连进行评估，同时拍照并记录结果： 0级：无粘连；Ⅰ级：轻度粘连，易分离；Ⅱ级：中度粘连，不易分离，但分离时不致撕裂肠管；Ⅲ级：高度粘连，不能分离，施行分离时可撕裂肠管. 1.2.4病理切片评价切取粘连处的盲肠组织，生理盐水洗净内容物后立即用40 g/L甲醛固定，常规石蜡切片，苏木精伊红染色，光镜下观察局部肠壁的病理改变. 根据炎性细胞的多少、成纤维细胞与间质细胞的增生、纤维蛋白的存在、间皮细胞与胶原纤维的排列、毛细血管的增生等情况，判断粘连程度. 统计学处理： 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，各组粘连程度分级程度的差异采用完全随机设计的多组等级资料比较的秩和检验KruskalWallis H检验，多重比较采用Nemenyi检验. 2结果 2.1一般情况各组家兔麻醉清醒后即可活动，精神、进食良好，伤口愈合好. 术后4 d ，A组动物死亡1只，剖腹探查死因为广泛肠粘连致绞窄性肠梗阻. 术后1 wk左右A，B，C组部分动物出现精神萎糜、食欲下降、活动减少等症状，A组最重，D组动物情况明显优于其他各组. 2.2肉眼观察所有存活家兔皮肤切口均为甲级愈合，术后1 wk和2 wk均未见腹腔内有明显的感染存在，盲肠未见穿孔，A组粘连最重，其次为B，C组，D组最轻( 图1). 2.3腹腔粘连程度比较术后1 wk和2 wk，家兔腹腔粘连程度A组与B，C组比较差异有统计学意义(P<0.05)，与D组比较差异有统计学意义(P<0.01)；B组和C组间差异均无统计学意义(P>0.05)；D组与B, C组比较差异有统计学意义(P<0.05,表1). A： 无粘连（0级）； B： 轻度粘连（Ⅰ级）； C： 中度粘连（Ⅱ级）； D： 高度粘连（Ⅲ级）.图1家兔术后肠管间和腹腔粘连情况表1各组间家兔术后腹腔粘连程度的比较 2.4形态学变化光镜下观察家兔腹腔粘连部位的病理改变，术后1 wk，A组： 有大量的成纤维细胞和炎性细胞浸润，组织水肿明显；B组： 有炎性细胞浸润，成纤维细胞较少，组织水肿，浆膜面有内皮及上皮细胞增生；C组： 仅有少量成纤维细胞浸润和炎性细胞浸润，组织轻度水肿，浆膜面有单层间皮细胞增生；D组： 无或仅有少许成纤维细胞浸润和炎性细胞浸润，水肿程度轻微(图2). 术后2 wk，A组： 处理侧浆膜面纤维组织增生明显，纤维粘连严重，浆膜层有淋巴细胞散在浸润；B组： 纤维粘连较轻；C组： 纤维蛋白少，纤维粘连轻微；D组： 浆膜面光滑平整，无纤维粘连(图3).A： 对照组；B： 壳聚糖组；C： 尿囊素组；D： 壳聚糖+尿囊素联合用药组. 3讨论 腹部手术后粘连发生机理以损伤炎症学说较流行［5］，正常情况下，浆膜间皮及间皮下血管中存在纤溶酶原激活因子，能使纤维蛋白的形成和水解处于动态平衡，以维持浆膜的光滑［6］. 当腹部手术或炎症刺激时，炎性细胞和受伤的间皮细胞产生纤溶酶原激活抑制物，导致纤维蛋白溶解作用降低［7］. 另外，成纤维细胞增生，分泌胶原纤维，多种因素造成永久性纤维粘连. 本实验结果显示，壳聚糖与尿囊素均具有防粘连的作用， HE染色光镜下观察也证实，用药组炎症反应轻，浆膜面有单层间皮细胞，光滑平整，达到生理性修复. 壳聚糖具有良好的生物相容性［8］，不易引发炎症反应，不被排斥，随着器官的蠕动而漫布于整个腹腔，起到润滑作用，将肠管和腹膜隔开，并最终可降解为对人体有益的氨基葡萄糖单体被吸收. 它可选择性促进上皮细胞、内皮细胞增长而抑制成纤维细胞生长［9］，从而改善内源性修复过程，促使组织生理性修复，减少胶原纤维合成. 可抑制出血及纤维蛋白束的形成，减少了因血肿机化而造成的组织粘连［10］. 关腹前注入尿囊素溶液，可以减少和消退胶原蛋白渗出，防止成纤维母细胞大量增殖，减轻肠管水肿，使腹膜上皮迅速修复. 病理组织学检查可以看出，尿囊素可很好地恢复间皮的连续性和完整性，防止术后肠粘连，抗炎抗渗出作用可以减少炎性渗出，从而减少纤维蛋白原和纤维蛋白析出，纤维蛋白性粘连较轻，这有利于间皮细胞的覆盖，达到生理性修复. 减少炎症渗出及炎性细胞的浸润，也是其减轻粘连的一个因素. 本实验结果显示，壳聚糖与尿囊素联合应用对预防术后腹腔粘连有协同作用，这可能与两者同时以不同的作用机理对抗粘连有关. 两者均无毒副作用［11］，联合用药预防术后粘连的发生率及粘连程度均明显降低，为术后腹腔粘连的预防提供了临床依据. 【参考文献】 ［1］ Liakakos T, Thomakos N, Fine P M, et al. Peritoneal adhesions: etiology, pathophysiology and clinical significance: Recent advances in prevention and management ［J］. Dig Surg, 2001,18(4):260-273. ［2］ Rasa K, Erverdi N, Karabulut Z, et al. The effect of methylene blue on peritoneal adhesion formation ［J］ . Turk J Gastroenterol，2002,13(2):108-111. ［3］ Vlahos A, Yu P, Lucas CE, et al. Effect of a composite membrane of chitosan and poloxamer gel on postoperative adhesive interactions ［J］. Am Surg, 2001,67(1):15-21. ［4］ Evans DM, McAree K, Guyton DP, et al. Dose dependency and wound healing aspects of the use of tissue plasminogen activator in the prevention of intraabdominal adhesions ［J］. Am J Surg, 1993,165(2):229-232. ［5］ Kramer K, Senninger N, Herbst H, et al. Effective prevention of adhesions with hyaluronate ［J］. Arch Surg, 2002,137(3):278-282. ［6］ Thaler K, Mack JA, Berho M, et al. Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation ［J］. 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